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TD-WS臺(tái)式大容量離心機(jī)提取乳酸脫氫酶及輔酶的方法

更新時(shí)間:2016-08-09      點(diǎn)擊次數(shù):3646
   通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設(shè)備有:(1)動(dòng)物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸鋰溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽;(7)TD-WS臺(tái)式大容量離心機(jī)等。
 
  TD-WS臺(tái)式大容量離心機(jī)提取乳酸脫氫酶及輔酶的具體操作方法:
 
1、輔酶I的制備:取動(dòng)物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鐘(抑制酶的活力,防止將輔酶I破壞),取出冷卻、剪碎,加入少許9g/LNaCl溶液及細(xì)沙用乳缽研磨成糊狀,再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,利用臺(tái)式離心機(jī)進(jìn)行離心沉淀,收集上清液,儲(chǔ)冰箱備用。
 
2、乳酸脫氫酶酶蛋白的提取:取動(dòng)物后腿肌肉2g置乳缽中,加入少許9g/LNaCl溶液及細(xì)砂,仔細(xì)研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,用雙層紗布過濾,濾液加活性炭0.5g振搖數(shù)分鐘后放置半小時(shí),并時(shí)常搖動(dòng),然后通過TD-WS臺(tái)式大容量離心機(jī)離心分離,取上清液備用。
 
  在細(xì)菌學(xué)診斷工作中,常需要從被檢材料中分離細(xì)菌,并獲得純培養(yǎng)(即單*種細(xì)菌的培養(yǎng)物)。因此,通常要用到離心機(jī)對(duì)樣品進(jìn)行離心分離,細(xì)菌的離心機(jī)分離培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)菌學(xué)診斷中的一項(xiàng)重要基本操作。根據(jù)被檢材料中可能存在的病原苗的特性,選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和培養(yǎng)條件:(溫度、氣體環(huán)境等)。進(jìn)行未知菌的初次分離,多用幾種培養(yǎng)基,如肉湯、鮮血瓊脂、麥康克瓊脂等,每種培養(yǎng)基接種數(shù)管,分別放在普通環(huán)境和厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。一般經(jīng)過24—78小時(shí)觀察結(jié)果,但也有一些病原菌,需要培養(yǎng)校長(zhǎng)時(shí)間才能生長(zhǎng)。
 
3、TD-WS臺(tái)式大容量離心機(jī)使用過程注意事項(xiàng) 
 
(1)離心機(jī)套管底部要墊棉花或試管墊。  
(2)電動(dòng)離心機(jī)如有噪音或機(jī)身振動(dòng)時(shí),應(yīng)立即切斷電源,即時(shí)排除故障。  
(3)離心管必須對(duì)稱放入套管中,防止機(jī)身振動(dòng),若只有一支樣品管另外一支要用等質(zhì)量的水代替。  
(4)啟動(dòng)離心機(jī)時(shí),應(yīng)蓋上離心機(jī)頂蓋后,方可慢慢啟動(dòng)。  
(5)分離結(jié)束后,先關(guān)閉離心機(jī),在離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)后,方可打開離心機(jī)蓋,取出樣品,不可用外力強(qiáng)制其停止運(yùn)動(dòng)。  
(6)離心時(shí)間一般1~2分鐘,在此期間,實(shí)驗(yàn)者不得離開去做別的事。
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